犬细胞间粘附分子1(ICAM1) elisa试剂盒实验常见问题解析:
问:加入底物显色后所有的孔颜色都较淡,*后OD读数都很小,没有明显的差别,请问是什么原因呢?上海轩泽康生物技术解答:由于颜色都很淡导致各个组分之间差异很小,结果不可用。可能造成的原因:
①抗体的孵育条件未达到要求:建议孵育温度控制在37-38℃,孵育时间严格按照说明书操作,保温期内不宜多开门以免影响保温。
②洗板次数过多、浓缩洗涤液稀释倍数不符合要求、洗涤冲击力过大、浸泡时间太长:建议严格按照说明书要求稀释浓缩洗涤液,减小洗涤冲击力;按要求滞留洗涤时间和洗涤次数。
③试剂温度不符合要求:建议所有试剂样品在使用前恢复至常温(平衡二十分钟左右。
④显色底物有多种:建议注意各种底物的使用方法以及*大吸收波长等的不同。
关于实验室中ELISA试剂盒的注意事项:适宜的温度:在建立ELISA方法作为反应动力学研究时,实验表明两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时产物的生成可达顶峰。为避免蒸发,板上应加盖也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,反应孔不已叠放,以确定各板的温度都能迅速平衡。应注意文娱的温度和时间应按规定力求准确。另外温育中还有边缘效应,边上的值会偏高,建议为了客观的判断结果将质控放在非边缘位置。