犬糖胺聚糖总量(GAG)elisa试剂盒操作步骤如下：
步骤一： | 从室温平衡60分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。 |
步骤二： | 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50ul。 |
步骤三： | 样本孔中加入待测样本50ul；空白孔不加。 |
步骤四： | 每孔加入生物素标记抗体50ul，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育30分钟；标准孔空白孔不加。 |
步骤五： | 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350ul），静置1分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。 |
步骤六： | 除去空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100ul，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育30分钟。 |
步骤七： | 重复步骤五 |
步骤八： | 每孔加入底物A、B各50ul，37℃避光孵育15分钟。 |
步骤九： | 每孔加入终止液50ul，15分钟内在450nm波长处测定各孔的OD值。 |
酶联免疫吸附实验常见问题解答：
问：加入底物显色后所有的孔颜色都较淡，*后OD读数都很小，没有明显的差别，请问是什么原因呢？上海轩泽康生物技术解答：由于颜色都很淡导致各个组分之间差异很小，结果不可用。可能造成的原因：①抗体的孵育条件未达到要求：建议孵育温度控制在37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作，保温期内不宜多开门以免影响保温。②洗板次数过多、浓缩洗涤液稀释倍数不符合要求、洗涤冲击力过大、浸泡时间太长：建议严格按照说明书要求稀释浓缩洗涤液，减小洗涤冲击力；按要求滞留洗涤时间和洗涤次数。③试剂温度不符合要求：建议所有试剂样品在使用前恢复至常温（平衡二十分钟左右。④显色底物有多种：建议注意各种底物的使用方法以及*大吸收波长等的不同。