小鼠可溶性血管内皮生长因子受体(sFLT)elisa试剂盒实验时的一些注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应平衡至室温后方可使用(约15~30分钟),酶标包被板开封后如未使用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓缩洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
4. 封板膜**一次性使用,以避免交叉感染。
5. 底物请避光保存。
正确的处理样本是保证ELISA检测正确性和准确性的第一步。上海轩泽康为您简单介绍不同类型的样本的处理方法:
【细胞裂解液】:①吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。②收集细胞血液1000g离心10分钟,弃去培养基用遇冷的PBS润洗三次。③加入适量的遇冷PBS或细胞裂解液(注意:临用前加入蛋白酶抑制剂重悬细胞)通常六孔板一个孔的细胞量需要150-250ulPBS重悬。④将样品放入-20或-80摄氏度,使样品冷冻。再放到室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可以将样品进行超声破碎以达到裂解的目的。⑤4摄氏度10000g离心十分钟,除去细胞碎片取上清,-20或-80摄氏度保存,避免反复冻融
【组织匀浆液】:①将组织样本用PBS(0.01M,PH7.4)冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质。②将组织块称重记录后剪碎,碎块应尽量小便于匀浆的更充分。③将组织按一定比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆,匀浆时置于冰上或者是冰浴中。通常按组织重量:PS体积=1:9的比例匀浆。检测后计算样品浓度时应该乘以相应的稀释倍数。④吸取凝胶液到离心管,4摄氏度5000g离心5-10分钟。取上清-20或-80摄氏度保存。避免反复冻融。