上海轩泽康生物小鼠基质金属蛋白酶12(MMP12) elisa试剂盒操作步骤:
1) 将标准品工作液依此加入到前两列孔中,每个浓度的工作液并列加两孔,每孔100ul.待测样品加入到其他孔,每孔100ul(若样本浓度高于检测范围,需要用标准品&样本稀释液稀释后取样)。给酶标板覆膜,37℃孵育90分钟。
2) 弃去液体,甩干,不用洗涤。每个孔中立即应加入生物素化抗体/抗原工作液100ul,混匀,酶标板加上覆膜,37℃孵育1小时。
3) 甩尽孔内液体,每孔加洗涤液350ul,浸泡1-2分钟,吸取或甩掉酶标板内的液体,再厚的吸水纸上拍干。如此重复洗板步骤3次。
4) 弃去孔内液体,洗板5次,方法步骤同3。
5) 每孔加底物溶液(TMB)90ul,混匀,加上覆膜,37℃避光孵育15分钟左右。
6) 每孔加终止液50ul,终止反应。
在实际操作中,除了挑选优良试剂外,有必要严厉依照操作过程进行操作,一起做好室内质控、室间质控,以严谨的工作作风检查每一份标本,才能确保检查质量。ELISA试剂盒如今国内已有适当数量的单位具有全自动酶标仪,这关于完成ELISA的规范化检查起到了重要作用。关于酶联免疫学辨别优劣的检测方法,上海轩泽康生物告诉您:
1) 选定一个检测范围内的浓度做多孔重复,可看出平行性好不好。即板内CV值的大小,此操作需要小心加样的准确性。对一些制作较粗糙的试剂盒来说板间CV值是较大的;可采用已知浓度的重组细胞因子,稀释到检测范围内作为样本加入,看检测的准确性;2) 对用待测指标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的*小浓度稀释,可测出灵敏度,建议5个复孔以上才有意义。一般厂家以20个复孔做出的结果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述,也可判断出所购试剂盒是否有夸大之说。