人活化T细胞核因子2(NFATC2) ELISA试剂盒操作程序总结:
1) 准备试剂,样品和标准品。
2) 加入准备好的样品和标准品,37℃反应30分钟。
3) 洗板5次,加入酶标试剂,37℃反应30分钟。
4) 洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色10分钟。
5) 加入终止液,15分钟内读OD值
6) 计算:以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。
人活化T细胞核因子2(NFATC2) ELISA试剂盒标本要求:
【细胞培养上清液】:检测分泌性的而成分时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)仔细收集上清。
【尿液、胸腹水、脑脊液】:无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
【组织标本】:切割标本后称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂,用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
常见问题及解答:
【加样问题】:加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加再孔壁上部的非包被区易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以加样不可太快,要避免加在孔壁上部。
【边缘效应问题】:聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规ELISA测定中,将板从室温置于37℃恒温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔质检可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度就可以很容易排除“边缘效应”问题,并且可以提高测定的重复性。