玻璃器皿的清洗、干燥、消毒:
细胞培养的和主要是玻璃容器与pasteur pipet,其它均为塑料无菌制品。实验用的玻璃容器与pasteur pipet使用前都要进行清洗。新购玻璃血清瓶先以0.1~0.05 N HCl 浸泡数小时,洗净后才开始使用。用过之玻璃血清瓶,以高压蒸汽灭菌,洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净,勿加清洁剂清洗。
实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖,高压蒸汽灭菌121℃, 15 lb, 20 分钟,置于oven中烘干。实验用玻璃pasteur pipet以干热灭菌170℃, 4 小时。
培养容器:种类有Tflask,plates, dishes, roller bottle等,依实验需要使用。
培养基的配制及分装液体培养基贮存于4℃ 冰箱,避免光照,实验进行前放在37℃ 水槽中温热。液体培养基(加血清)存放期为六个月,期间glutamine可能会分解,若细胞生长不佳,可以再添加适量glutamine。
粉末培养基(以1 升为例)之配制体积为900 ml,pH为7.2-7.4。NaHCO3 为另外添加,若将NaHCO3粉末直接加入液体培养基中会造成pH之误差,或局部过碱。因此粉末培养基及NaHCO3粉末应分别溶解后才混合,然后用CO2气体调整pH,而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH),因为氯离子对细胞生长可能有影响,且贮存时培养基的pH易发生改变。高压灭菌后添加血清。